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采用雙三元液相色譜(Dualgradientliquidchromatography,DGLC)建立了在線固相萃取技術(shù)與電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用方法(OnlineSPEDGLC鄄ESIMS/MS),并成功應(yīng)用于實際樣品檢測。本方法同時檢測大豆不同部位中的4種酸堿性植物激素(赤霉素(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、玉米素(ZT)和脫落酸(ABA))。通過考察固相萃取富集柱、分析色譜柱、流動相對植物激素的保留和選擇性的影響,獲得較高的靈敏度、回收率、穩(wěn)定性及精密度。大豆樣品經(jīng)液氮低溫研磨,以80%甲醇溶液提取,再經(jīng)離心稀釋過濾后,進樣分析。進樣后樣品經(jīng)在線固相萃取HypersepRetainAX柱洗脫保留,目標分析物依次轉(zhuǎn)移至分析柱AcclaimPA2色譜柱,并以0.1%甲酸和甲醇溶液作為流動相進行梯度洗脫,采用選擇反應(yīng)監(jiān)測離子模式(SRM)同時采集正負離子通道進行定性分析,基質(zhì)標準曲線外標法進行定量分析,GA3,IAA,ZT在0.1~50滋g/L范圍內(nèi)線性良好,檢出限為0.0002滋g/g;ABA在0.5~50滋g/L的范圍內(nèi)線性良好,其檢出限為0.0010滋g/g。以0.8,4.0和40滋g/L分別為低、中、高濃度考察4種植物激素的回收率為76.1%~93.5%,RSD為0.8%~6.0%。結(jié)果表明,籽粒含有的ABA濃度明顯高于其它部位。本研究為快速準確地分離和測定大豆不同部位內(nèi)源激素提供了有效方法。