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WB實驗注意細節(jié)

時間:2025/5/28閱讀:186
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WB實驗注意細節(jié)

1. 細胞樣本,收細胞時, PBS預(yù)冷。

2. 組織樣本在取材時離體組織應(yīng)盡快凍存,可以置于液氮中迅速冷凍,使用組織勻漿機進行勻漿時, 一次研磨時間不宜過長, 40s左右即可,如研磨不充分,可再次研磨。

3. PMSF應(yīng)注意搖勻至無結(jié)晶時方可使用。

4. 冰上裂解時,可以晃動以使裂解充分。

5. 裂解后的樣本盡量分裝保存,避免反復(fù)凍融,盡快變性使用。

6. BCA定量時盡量不使用96孔板最邊緣一圈(由于有些儀器邊緣效應(yīng))。

7. 樣本可以根據(jù)具體情況稀釋合適的倍數(shù)再進行定量,以免超出標(biāo)曲范圍。

8. BCA定量時,可以使用儀器中速輕微震蕩3-10秒,混勻96孔板內(nèi)液體,再進行測量。

9. 變性時,注意加熱后小心管蓋爆開。

10. 配膠時,板子一定徹底清洗干凈。

11. 配膠的各組分注意充分混勻。

12. 點樣時,多余的孔可以用loading buffer補齊。

13. 轉(zhuǎn)膜時, 一定帶手套才可以觸碰濾紙和膜,以防污染。

14. 轉(zhuǎn)膜不可放反,牢記黑膠白膜,注意電極正負極。

15. 封閉時, BSA或牛奶一定充分溶解。

16. 抗體種屬要注意區(qū)分。

17. 洗膜要充分。

18. 顯影液應(yīng)滴加均勻。

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