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血細(xì)胞計數(shù)板的實驗原理及注意事項
閱讀：7713發(fā)布時間：2022-2-15
實驗原理
在細(xì)胞培養(yǎng)工作中，常需要了解細(xì)胞生活狀態(tài)和鑒別細(xì)胞是否存活，確定細(xì)胞接種濃度和數(shù)量以及了解細(xì)胞活力和增殖狀況，如胰酶消化制備的細(xì)胞懸液中細(xì)胞存活率確定，凍存細(xì)胞復(fù)蘇后的活力檢測等。
存活測試的原理為染料排除實驗，利用染料會滲入死細(xì)胞中而呈色，因活細(xì)胞細(xì)胞膜完整，染料無法滲入而不會呈色。一般使用臺盼藍(lán)染料，如果細(xì)胞不易吸收臺盼藍(lán)，則用赤蘚紅B。計算細(xì)胞活率：活細(xì)胞數(shù)/（活細(xì)胞數(shù)+死細(xì)胞數(shù)）×100%。計數(shù)應(yīng)在臺盼藍(lán)染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成，隨時間延長，部分活細(xì)胞也開始攝取染料；因為臺盼藍(lán)與蛋白質(zhì)有很強的親和力，用不含血清的稀釋液，可以使染色計數(shù)更為準(zhǔn)確。
注意事項
滴細(xì)胞懸液時要干凈利落，加量要適當(dāng)，過多易使蓋片漂移，或淹過蓋片也會失敗，應(yīng)重做；過少易出現(xiàn)氣泡；不理想時，應(yīng)重做。
鏡下計數(shù)時，若方格中細(xì)胞分布明顯不均勻，說明細(xì)胞懸液混合不均勻，需重新將細(xì)胞懸液進(jìn)行混合，再重新計數(shù)。
計數(shù)時，對于位于邊線或交界處的細(xì)胞/細(xì)胞團(tuán)，遵循“計上不計下，計左不計右”的規(guī)則。
一個細(xì)胞團(tuán)計做一個細(xì)胞。
計數(shù)板計數(shù)時，最適濃度為5～10×105細(xì)胞/ml，此范圍外計數(shù)誤差偏大。高濃度細(xì)胞懸液，可取出部分作稀釋或連續(xù)稀釋后計數(shù)。如果細(xì)胞數(shù)目很少則要進(jìn)行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中。
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