MEM 培養(yǎng)基

Minimum Essential Medium（MEM）

也稱必需培養(yǎng)基，它僅含有12種必需氨基酸、和8種維生素。成分簡單，可廣泛適應各種已建成細胞系和不同地方的哺乳動物細胞類型的培養(yǎng)。MEM-Alpha一般用于培養(yǎng)一些難培養(yǎng)細胞類型，而其它沒有特殊之處的細胞株則幾乎均可采用MEM來培養(yǎng)。

運輸和保存

運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個月；-20℃，避光，保存6個月。

1）復蘇MEM：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查MEM密度。

2）細胞傳代：如果MEM密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗MEM 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若MEM大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待MEM生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

1.使用MEM時應注意無菌操作，避免污染。

2.本產(chǎn)品含有血清和雙抗，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可以直接使用。

3.為保持本MEM的優(yōu)良使用效果，不宜將其長時間放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。

4.所有產(chǎn)品請于保質(zhì)期內(nèi)使用，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。

5.本產(chǎn)品只供進一步科研使用，不可應用于臨床等其他方面。

6.培養(yǎng)基凍融后，可能會有少量絮狀物析出，不影響MEM正常使用。