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NK細(xì)胞治療全解析-工藝篇

2024-7-8  閱讀(323)

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隨著NK細(xì)胞治療熱度的持續(xù)攀升,其合規(guī)生產(chǎn)也越來(lái)越受重視,本文重點(diǎn)講述了幾個(gè)不同來(lái)源NK細(xì)胞的工藝開(kāi)發(fā)案例和未來(lái)展望:

一、PB-NK/外周血NK:

*滋養(yǎng)細(xì)胞共培養(yǎng)

收集健康供體單采血,并從中分離外周血單個(gè)核細(xì)胞,再用VarioMACS設(shè)備去除T細(xì)胞后,將其轉(zhuǎn)移到A-350N透氣袋中與輻照后的自體PBMC共培養(yǎng),添加OKT3和IL-2,經(jīng)14天培養(yǎng),可以獲得高純度的NK細(xì)胞(>98%,CD3?CD16+CD56+),且擴(kuò)增倍數(shù)可達(dá)520-860。

*無(wú)滋養(yǎng)細(xì)胞

此外,也有研究開(kāi)發(fā)了無(wú)滋養(yǎng)細(xì)胞,符合GMP的NK細(xì)胞規(guī)?;a(chǎn)工藝。取代滋養(yǎng)細(xì)胞的是可以表達(dá)IL-21和41BB配體的膜顆粒。

首先用CliniMACS Prodigy系統(tǒng)去除CD3+T細(xì)胞,并通過(guò)膜顆粒刺激NK細(xì)胞并在Prodigy中初步擴(kuò)增;然后轉(zhuǎn)移到Xuri波浪生物反應(yīng)器中通過(guò)灌流培養(yǎng)進(jìn)行規(guī)模擴(kuò)增。

最后,NK細(xì)胞通過(guò)LOVO設(shè)備進(jìn)行清洗收獲,并使用CBS 2101降溫儀進(jìn)行低溫保存。該工藝在不到2周的時(shí)間內(nèi)可以使PB-NK細(xì)胞擴(kuò)增1000倍,而且NK細(xì)胞在該平臺(tái)培養(yǎng)40多天之后,可以實(shí)現(xiàn)高達(dá)10^8倍的擴(kuò)增效果,同時(shí)保持細(xì)胞毒性潛能。





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