在細(xì)胞分析與臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域,血清總鐵結(jié)合力(Total Iron Binding Capacity,TIBC)檢測(cè)具有重要意義。TIBC是評(píng)估機(jī)體鐵代謝狀態(tài)的關(guān)鍵指標(biāo)之一,它反映了血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合鐵的能力,可用于診斷鐵缺乏癥、缺鐵性貧血以及某些鐵代謝異常疾病。本文將深入探討血清總鐵結(jié)合力檢測(cè)的工作原理,從檢測(cè)原理、檢測(cè)方法及其特點(diǎn)、質(zhì)量控制與影響因素等方面進(jìn)行全面解析。
血清總鐵結(jié)合力是指血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白能夠結(jié)合的最大鐵量。正常情況下,轉(zhuǎn)鐵蛋白分子中約有三分之一的結(jié)合位點(diǎn)被鐵占據(jù),其余為未飽和狀態(tài)。TIBC檢測(cè)的實(shí)質(zhì)是通過使轉(zhuǎn)鐵蛋白的未結(jié)合鐵的結(jié)合位點(diǎn)飽和,然后測(cè)定此時(shí)鐵的總量,從而計(jì)算出轉(zhuǎn)鐵蛋白的總鐵結(jié)合能力。
檢測(cè)方法的核心在于將樣本中的轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和化,然后準(zhǔn)確測(cè)定飽和后的鐵含量。這需要特定的化學(xué)反應(yīng)和檢測(cè)技術(shù)來實(shí)現(xiàn)。
放射免疫分析法利用放射性核素標(biāo)記的鐵標(biāo)記物與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的特性來測(cè)定TIBC。具體步驟如下:
首先,將放射性核素(如59Fe)標(biāo)記的鐵與未標(biāo)記的鐵混合,形成競爭結(jié)合體系。
然后,將該混合物與患者的血清樣本一起孵育,血清中的轉(zhuǎn)鐵蛋白會(huì)與鐵結(jié)合。
經(jīng)過一段時(shí)間的孵育后,未結(jié)合的鐵通過特定的方法(如利用轉(zhuǎn)鐵蛋白與其他大分子物質(zhì)的結(jié)合差異進(jìn)行分離)與結(jié)合的鐵分離。
最后,用放射性檢測(cè)儀器測(cè)量與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的放射性鐵的量,即可計(jì)算出TIBC。
這種方法具有高靈敏度和特異性,能夠檢測(cè)低濃度的轉(zhuǎn)鐵蛋白鐵結(jié)合能力。然而,放射性核素的使用對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境和操作人員的要求較高,需要嚴(yán)格的防護(hù)措施,并且放射性核素的獲取和處理相對(duì)復(fù)雜,成本也較高。
化學(xué)發(fā)光免疫分析法基于免疫反應(yīng)和化學(xué)發(fā)光信號(hào)的產(chǎn)生。其原理是利用與轉(zhuǎn)鐵蛋白特異性結(jié)合的抗體,通過化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的催化反應(yīng)產(chǎn)生光信號(hào),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)鐵蛋白鐵結(jié)合能力的定量檢測(cè)。
在檢測(cè)過程中,將患者的血清樣本與帶有化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體一起孵育。
抗體與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合后,加入相應(yīng)的底物,在酶的催化下產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。
化學(xué)發(fā)光信號(hào)的強(qiáng)度與轉(zhuǎn)鐵蛋白的量成正比,通過測(cè)量化學(xué)發(fā)光信號(hào)的強(qiáng)度,即可計(jì)算出TIBC。
該方法具有靈敏度高、線性范圍寬、操作相對(duì)簡便等優(yōu)點(diǎn),適用于自動(dòng)化檢測(cè)平臺(tái),檢測(cè)速度快,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。目前,它已被廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)室中,成為血清總鐵結(jié)合力檢測(cè)的常用方法之一。
比色法是傳統(tǒng)的TIBC檢測(cè)方法之一,其原理是基于鐵與某些顯色劑的反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化。例如,鐵與亞鐵嗪(ferrozine)反應(yīng)生成紅色的絡(luò)合物,顏色的深淺與鐵的濃度成正比。在TIBC檢測(cè)中,先將血清中的轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和化,使所有未結(jié)合的鐵位點(diǎn)結(jié)合鐵,然后通過顯色反應(yīng)測(cè)定鐵的總量。
首先,加入過量的鐵(通常為鐵鹽溶液),使血清中的轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合位點(diǎn)飽和。
然后,加入顯色劑(如亞鐵嗪)與其他成分進(jìn)行反應(yīng)。
最后,通過比色儀測(cè)量溶液顏色的吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出TIBC。
比色法的優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備簡單、成本較低,但其靈敏度和特異性相對(duì)較低,容易受到其他成分的干擾,如血清中的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等可能會(huì)影響顏色反應(yīng)的結(jié)果。此外,該方法需要較多的樣本量,且操作步驟相對(duì)繁瑣,對(duì)操作人員的技術(shù)水平要求較高,以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。
無論采用哪種檢測(cè)方法,嚴(yán)格的質(zhì)量控制都是確保TIBC檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的關(guān)鍵。
室內(nèi)質(zhì)量控制:每次檢測(cè)時(shí),應(yīng)同時(shí)檢測(cè)低、中、高三個(gè)濃度水平的TIBC質(zhì)控品。這些質(zhì)控品應(yīng)與患者樣本同時(shí)進(jìn)行前處理和檢測(cè)操作。如果質(zhì)控結(jié)果超出設(shè)定的控制限(通常為均值 ± 2SD或±3SD),則表明檢測(cè)系統(tǒng)存在問題,需要查找原因并采取糾正措施。例如,某實(shí)驗(yàn)室使用的TIBC質(zhì)控品的靶值為低濃度150 μg/dL、中濃度250 μg/dL、高濃度350 μg/dL,其控制限分別為均值 ± 2SD(如低濃度控制限為140 - 160 μg/dL,中濃度為240 - 260 μg/dL,高濃度為340 - 360 μg/dL)。若質(zhì)控結(jié)果超出此范圍,則需暫停檢測(cè),檢查儀器性能、試劑狀態(tài)、操作步驟等,直至質(zhì)控結(jié)果合格。
室間質(zhì)量評(píng)價(jià):實(shí)驗(yàn)室應(yīng)積極參加由國家或地區(qū)臨床檢驗(yàn)中心組織的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)。通過與其他實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比,發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)室存在的系統(tǒng)誤差等問題,并采取相應(yīng)的改進(jìn)措施。例如,在室間質(zhì)評(píng)中發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)室的TIBC檢測(cè)結(jié)果整體偏高,經(jīng)分析可能是由于試劑批次變更后未及時(shí)重新校準(zhǔn)儀器所致。針對(duì)此問題,實(shí)驗(yàn)室需重新校準(zhǔn)儀器,調(diào)整檢測(cè)參數(shù),并對(duì)新舊試劑批次進(jìn)行比對(duì)實(shí)驗(yàn),確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。
溶血:溶血會(huì)導(dǎo)致血紅蛋白釋放,血紅蛋白中的鐵可以與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合,從而影響TIBC的檢測(cè)結(jié)果。溶血會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高,因此在樣本采集和處理過程中應(yīng)盡量避免溶血。如靜脈穿刺時(shí)應(yīng)使用適當(dāng)規(guī)格的針頭,采血時(shí)避免過度擠壓血管,將血液注入試管時(shí)應(yīng)輕柔,避免產(chǎn)生氣泡等。如果樣本出現(xiàn)溶血現(xiàn)象,應(yīng)重新采集樣本進(jìn)行檢測(cè)。
脂血:脂血中的甘油三酯等成分可能干擾TIBC檢測(cè)的化學(xué)反應(yīng)或比色過程,導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。對(duì)于脂血樣本,可采用適當(dāng)?shù)臉颖厩疤幚矸椒?,如離心分離去除上層脂肪層,或使用脂血校正方法進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí),在報(bào)告檢測(cè)結(jié)果時(shí),應(yīng)注明樣本存在脂血情況,以便臨床醫(yī)生在解讀結(jié)果時(shí)考慮這一因素。
黃疸:黃疸患者血清中的膽紅素含量升高,膽紅素具有還原性,可能與檢測(cè)反應(yīng)中的氧化劑發(fā)生反應(yīng),影響TIBC的檢測(cè)結(jié)果。在檢測(cè)黃疸樣本時(shí),應(yīng)選擇對(duì)膽紅素不敏感的檢測(cè)方法,或采用校正公式對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行修正。此外,嚴(yán)重黃疸樣本可能需要進(jìn)行稀釋后重新檢測(cè),以減少膽紅素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。
藥物干擾:某些藥物可能影響鐵的代謝或轉(zhuǎn)鐵蛋白的功能,進(jìn)而影響TIBC的檢測(cè)結(jié)果。例如,口服鐵劑會(huì)使血清鐵水平升高,而TIBC可能會(huì)暫時(shí)性降低;長期使用某些藥物如苯妥英鈉等,可能干擾鐵的吸收和代謝,導(dǎo)致TIBC升高或降低。在檢測(cè)前,應(yīng)詳細(xì)詢問患者的用藥史,對(duì)于可能影響TIBC檢測(cè)結(jié)果的藥物,應(yīng)在停藥一定時(shí)間后進(jìn)行檢測(cè),或在報(bào)告結(jié)果時(shí)注明患者正在使用的藥物,以便臨床醫(yī)生綜合判斷。
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