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戴安液相色譜柱如何正確使用緩沖鹽

閱讀:1468      發(fā)布時間:2018-11-26
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  戴安液相色譜柱在使用前,進行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行,只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。
 

  戴安液相色譜柱適用范圍廣,從極性化合物到非極性化合物都可獲得良好的分離,在碳水化合物如低聚糖、苷類糖化學,生藥學和天然產(chǎn)物化學,生物物質(zhì)如多肽、蛋白、核酸等多個領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。
 

  戴安液相色譜性能特點:

  1、可使用100%水系流動相,柱內(nèi)不會出現(xiàn)坍塌現(xiàn)象。

  2、適合于分離親水性化合物。

  3、與常規(guī)ODS不同的選擇性,加強極性化合物的保留,適合于分離純化肽類和生物分子。

  4、酸性環(huán)境下比普通ODS柱具有更長使用壽命。
 

  戴安液相色譜柱正確使用緩沖鹽:

  緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機溶劑,因此緩沖鹽使用不當會使其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結(jié),柱壓上升;同時阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。

  正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話:使用前要過濾,使用后要沖洗。具體方法如下:

  1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min;使用后去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱過夜。

  2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前,用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min,再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩,以避免梯度過程中緩沖鹽析出。

  3、緩沖鹽析出的補救方法:

  方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min

  方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。

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