在生命活動中，機體持續(xù)產(chǎn)生自由基。適量的自由基參與生理過程，然而過量自由基會引發(fā)氧化應(yīng)激，損害細(xì)胞和組織，與衰老、癌癥等多種疾病密切相關(guān)。因此，抗氧化能力的評估成為生命科學(xué)、食品科學(xué)等領(lǐng)域的重要研究內(nèi)容。目前，常用的抗氧化能力評估方法眾多，其中三大測定方法——DPPH自由基清除法、ABTS自由基陽離子清除法和FRAP法（鐵離子還原能力測定法），因其操作相對簡便、結(jié)果可靠等優(yōu)勢，得到了廣泛應(yīng)用。

1. 以氧化還原潛力評價的抗氧化能力

FRAP法：

在酸性環(huán)境下，抗氧化物質(zhì)能夠?qū)e3+-三吡啶三嗪（Fe3+-TPTZ）還原，生成藍(lán)色的Fe2+-TPTZ。通過在593nm波長處檢測吸光度的變化，并以標(biāo)準(zhǔn)抗氧化劑Trolox作為對照體系，從而量化抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。

優(yōu)點：由于該反應(yīng)在酸性條件下進行，可以有效抑制內(nèi)源性干擾因素，確保測定結(jié)果的準(zhǔn)確性

缺點：由于含有巰基（-SH）的有機物質(zhì)無法與三價鐵離子發(fā)生反應(yīng)，因此該方法無法測定硫醇化合物的還原能力。

適用樣本：該方法適用范圍廣泛，適用于生物體液、食品、植物提取液、果汁等多種物質(zhì)的總抗氧化能力檢測。

2. 以清除自由基能力評價的抗氧化能力

ABTS法

ABTS與氧化劑反應(yīng)生成評價體系的基礎(chǔ)——穩(wěn)定的藍(lán)綠色陽離子自由基ABTS+，該自由基能溶于水相或酸性乙醇介質(zhì)中，并在734nm處呈現(xiàn)最大吸收峰。當(dāng)被測物質(zhì)加入ABTS+溶液后，其含有的抗氧化成分會與ABTS+發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致反應(yīng)體系褪色。ABTS+的還原程度及反應(yīng)時間取決于生物活性物質(zhì)的抗氧化能力和濃度。通過在734nm處檢測吸光度的變化，并以Trolox作為對照體系，可量化抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。

優(yōu)點：ABTS法具有快速、簡便、特異性高、與抗氧化劑的生物活性相關(guān)性*強、pH適用范圍寬泛等優(yōu)勢，尤其適用于水溶性物質(zhì)的檢測。

缺點：作為一種間接檢測方法，ABTS法需要制備自由基的發(fā)生體系。

適用樣本：廣泛應(yīng)用于親水性和親脂性物質(zhì)、純物質(zhì)以及蔬菜、水果、飲料等樣品的總抗氧化能力評價。

DPPH法

該方法基于穩(wěn)定的粉紅色DPPH構(gòu)建了一套評價體系。DPPH作為一種穩(wěn)定的自由基，易溶于甲醇、乙醇等極性溶劑。當(dāng)抗氧化物質(zhì)加入反應(yīng)體系時，DPPH會被還原，其顏色逐漸從粉紅色變?yōu)辄S色。由于DPPH在515nm處具有最大吸收峰，因此可以通過吸光度的變化，并以Trolox作為對照，來量化抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。

優(yōu)點：此方法簡單快捷，相較于ABTS法，無需制備自由基發(fā)生體系，特別適用于醇溶性物質(zhì)的檢測。

缺點：DPPH自由基的選擇性較強，不與僅含一個羥基的芳香酸或無羥基的類黃酮反應(yīng)，這類物質(zhì)需采用其他方法進行測定。此外，若反應(yīng)體系中存在在515nm處有吸收的物質(zhì)（如胡蘿卜素），結(jié)果將受到干擾。由于血漿中的蛋白質(zhì)在醇溶液中會沉淀，該方法也不適用于檢測血漿的抗氧化能力。

適用樣本：該方法廣泛應(yīng)用于食品、植物提取液、果汁等物質(zhì)的總抗氧化能力檢測。