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為什么你的細(xì)胞生長緩慢？2022/03/04
細(xì)胞生長緩慢的常見原因:(1)培養(yǎng)基可能缺乏細(xì)胞生長所需的某種因子。通常情況下，當(dāng)小伙伴購買細(xì)胞，并沒有按照ATCC或國內(nèi)細(xì)胞庫推薦的方法制備培養(yǎng)基，使用實驗室兄弟姐妹使用的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。解決方法一般是按照推薦的方法制備培養(yǎng)基，或直接購買培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。(B)細(xì)菌、支原體、真菌等污染:雖然培養(yǎng)基中通常添加雙抗體(青霉素和鏈霉素)，但如果無菌操作觀念不強(qiáng)，仍有可能造成污染。處理方法:如果有冷凍細(xì)胞，可以丟棄污染細(xì)胞。當(dāng)然，丟棄并不是隨意的，扔進(jìn)垃圾桶。應(yīng)按照實驗室生物安全規(guī)定進(jìn)行。然后復(fù)蘇培
支原體污染對細(xì)胞培養(yǎng)的危害！2022/03/03
1.支原體污染的普遍性支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域遇到的性問題，據(jù)文獻(xiàn)報道，綜合美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）、美國模式菌種收集中心(ATCC)等機(jī)構(gòu)收到的相關(guān)數(shù)據(jù)，世界各國細(xì)胞系支原體污染的平均比例為30-60%。該數(shù)據(jù)未統(tǒng)計中國大陸的數(shù)據(jù)，但可以確定，大陸地區(qū)的支原體污染比例與此相當(dāng)，或更嚴(yán)重。2.支原體污染的危害根據(jù)已發(fā)表的支原體污染研究文獻(xiàn)，支原體污染細(xì)胞后，幾乎能影響每一個細(xì)胞參數(shù)。1）支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞染色體的異常和損傷，改變細(xì)胞的代謝、生長、形狀、附著。2）支原體影響被污染細(xì)胞的
免疫ELISA測定錯誤結(jié)果的原因分析2022/03/02
ELISA即酶聯(lián)吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。Engvall和Perlmann于1971年先應(yīng)用該法進(jìn)行了IgG定量測定，并命名為"enzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)"。ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗體）結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗體）與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo)抗原（或抗體），而且此酶標(biāo)抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③測定時將受檢標(biāo)本（抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原（或抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或
做實驗選擇原代細(xì)胞還是細(xì)胞株？2022/03/01
各種已被命名和經(jīng)過細(xì)胞生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系或細(xì)胞株，都是一些形態(tài)比較均一、生長增殖比較穩(wěn)定的和生物性狀清楚的細(xì)胞群。因此凡符合上述情況的細(xì)胞群也可給以相應(yīng)的名稱，即文獻(xiàn)中常稱之為已鑒定的細(xì)胞（CertifiedCells）。已鑒定的細(xì)胞可用于各種實驗研究和生產(chǎn)生物制品，當(dāng)前世界上已建的各種細(xì)胞系（株）已難勝數(shù)。體外培養(yǎng)細(xì)胞的種類和命名體外培養(yǎng)細(xì)胞的名稱，隨培養(yǎng)細(xì)胞技術(shù)的發(fā)展和細(xì)胞種類的增多而演變。最早采用的名稱為細(xì)胞株（Cellstrain），以后又出現(xiàn)細(xì)胞系（CellLine）一詞，兩者曾一度混
流式細(xì)胞術(shù)實用技巧！2022/02/28
流式細(xì)胞技術(shù)（flowcytometry，F(xiàn)CM）是利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行的一種單細(xì)胞定量分析和分選技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)是單克隆抗體及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、激光和電子計算機(jī)科學(xué)等高度發(fā)展及綜合利用的高技術(shù)產(chǎn)物。一、基本結(jié)構(gòu)流式細(xì)胞儀由三部分構(gòu)成1.液流系統(tǒng)，包括流動室和液流驅(qū)動系統(tǒng);2.光學(xué)系統(tǒng)，包括激發(fā)光源和光束收集系統(tǒng);3.電子系統(tǒng)，包括光電轉(zhuǎn)換器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。流式細(xì)胞儀的I作原理是使懸浮在液體中分散的經(jīng)熒光標(biāo)記的細(xì)胞或微粒逐個通過樣品池，同時由熒光探測器捕獲熒光信號并轉(zhuǎn)換成分別代表前向散射角、側(cè)向散
血清產(chǎn)生沉淀該如何避免？2022/02/16
怎么樣才能避免血清中產(chǎn)生沉淀呢？首先我們需要了解下什么是血清以及血清的主要作用指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋原白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對培養(yǎng)中的細(xì)胞的起到某些保護(hù)作用。主要作用1.提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長必須的物質(zhì)。2.提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮
胎牛血清的常見問題匯總2022/02/15
1.血清的保存溫度？未拆封的血清應(yīng)保存在-15℃至-20℃，避免反復(fù)凍融。拆封后的血清應(yīng)無菌分裝成適當(dāng)?shù)挠昧坎⒋娣庞?15℃至-20℃，2~8℃溶解后建議一個月內(nèi)使用。2.血清的有效期是多久？大部分血清效期是5年，針對每個批次，請通過質(zhì)檢文件確定具體效期日期。3.血清應(yīng)如何融解？血清從冷凍箱取出后，置于2～8℃冰箱使之融解，不時規(guī)則地?fù)u晃均勻，充分融解后分裝或使用。4.為什么有時血清中出現(xiàn)沉淀？是否需要去除？如何去除？血清中的白色沉淀主要是脂蛋白、冷凝集素、玻連蛋白、胎球蛋白、磷酸鈣、膽固醇等、
細(xì)胞凋亡你真的懂了嗎2022/02/14
細(xì)胞凋亡(apoptosis)是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，在一定的條件下，細(xì)胞遵循的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用；它并不是病理條件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。細(xì)胞凋亡(apoptosis)是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，在一定的條件下，細(xì)胞遵循的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用；它并不
培養(yǎng)細(xì)胞時如何正確的使用胎牛血清2022/02/11
牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基，與合成的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配合使用，一般添加使用量在10~20%，主要作用是提供細(xì)胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和生長因子等。養(yǎng)過細(xì)胞的小伙伴們應(yīng)該都知道：血清，由于其復(fù)雜的內(nèi)在成分和難以控制的外界因素，它既是細(xì)胞生長的營養(yǎng)，也是細(xì)胞死亡的“致命du藥”，當(dāng)我們廢寢忘食的，嘔心瀝血的，鞠躬盡瘁的養(yǎng)著細(xì)胞同時，也極有可能因為一時的疏忽和大意選擇了品質(zhì)不好的血清，導(dǎo)致珍貴的細(xì)胞意外身外，一切歸零，不得不重頭開始!血清質(zhì)量的差異性大市場上各種血清產(chǎn)品魚龍混珠，一不小心，你可能就
細(xì)胞的復(fù)蘇經(jīng)驗總結(jié)！2022/02/10
在細(xì)胞復(fù)蘇過程中，有多次復(fù)蘇失敗，最終在查閱了相關(guān)技術(shù)積累了足夠的復(fù)蘇技能后復(fù)蘇成功，現(xiàn)將細(xì)胞復(fù)蘇的操作程序和注意事項總結(jié)如下，望能為實驗人提供些參考。材料1.常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)儀器設(shè)備、恒溫水浴振蕩器。2.培養(yǎng)液（DMEM）胎牛血清（CBS）二甲基亞砜（DMSO）。操作程序1.細(xì)胞實驗室進(jìn)行常規(guī)消毒，紫外照射40min以上。2.培養(yǎng)液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒溫水浴箱370C預(yù)熱20min，備用。3.二甲基亞砜（DMSO)在4度冰箱中冷藏30min，備用。4.從液氮保存罐中
原代細(xì)胞如何取材，這些你都會嗎？2022/02/09
一、取材的基本要求1．取材要注意新鮮和保鮮2．應(yīng)嚴(yán)格無菌3．防止機(jī)械損傷4．去除無用組織和避免干燥5．應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等6．作好記錄二、各類組織的取材技術(shù)皮膚和粘膜的取材內(nèi)臟和實體瘤的取材血液細(xì)胞的取材骨髓、羊水、胸/腹水細(xì)胞取材動物組織取材人胚體組織取材雞（鴨）鳥類胚胎組織取材皮膚和粘膜的取材主要取自于手術(shù)過程中的皮片，方法似外科取斷層皮片手術(shù)操作，但面積一般2~4c㎡。內(nèi)臟和實體瘤的取材內(nèi)臟除消化道外基本是無菌的，但取材時要明確和熟悉所需組織的類型和部位，實體瘤取材時要取腫瘤細(xì)
細(xì)胞培養(yǎng)前的需做哪些準(zhǔn)備工作？2022/02/08
實驗人員的無菌準(zhǔn)備：1.肥皂洗手。2.穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋3.用75％酒精棉球擦凈雙手。無菌操作的演示：1.凡是帶入超凈工作臺內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精燈火焰操作。3.器皿使用前必須過火滅菌4.繼續(xù)使用的器皿（如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時仍要過火。5.各種操作要靠近酒精燈，動作要輕、準(zhǔn)確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。6.吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管，防止交叉污染。準(zhǔn)備室的設(shè)備：單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾
如何配置培養(yǎng)基2022/02/07
培養(yǎng)基有很多種，你要配制哪一種呢？你要查清楚，你要配的培養(yǎng)基的成分有那些，然后把要用的東西找到。在配制之前你要把裝培養(yǎng)基的容器準(zhǔn)備好，是用試管、平皿還是三角瓶。之后看要配的是固體培養(yǎng)基還是液體培養(yǎng)基，覺得是否放瓊脂或明膠。之后找來一個大燒杯，依次把要放的物質(zhì)放入，要是配的是固體培養(yǎng)基要把加入瓊脂或明膠的培養(yǎng)基放在電爐上加熱，待瓊脂或明膠*溶解后趁熱迅速分裝。之后把分裝好的培養(yǎng)基封口，之后選擇是干滅還是濕滅，等滅菌之后，配制培養(yǎng)基的工作就完成了。培養(yǎng)基的配制與滅菌1目的1.1了解并掌握培養(yǎng)基的配制
胎牛血清、新生牛血清和小牛血清有何區(qū)別呢？2022/01/21
血清分為很多類別比如：胎牛血清、小牛血清、新生牛血清、透析型胎牛血清、天然低IGG胎牛血清、干細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清、特殊用途胎牛血清、活性炭/葡萄糖處理胎牛血清、胎牛血清替代物、加強(qiáng)型小牛血清、補(bǔ)鐵小牛血清、成牛血清、供體馬血清、兔血清、雞血清、豬血清、馬血清、其他動物血清、合成血清替代品等等，但是每種血清的來源以及用途方法都是有所不同的。那么，我們就來詳細(xì)的了解一下吧！1、其來源不同：胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)是在屠宰懷孕八月齡胎牛,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生
ELISA試劑盒檢測注意事項2022/01/20
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。1．樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)
冷凍細(xì)胞活化步驟2022/01/19
1.冷凍細(xì)胞的活化原則為快速解凍，避免冰晶重新結(jié)晶對細(xì)胞造成傷害，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。2.細(xì)胞活化后，約需數(shù)日，或繼代一至二代，其細(xì)胞生長或特性表現(xiàn)才會恢復(fù)正常(例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì))。2y2QO6\#o&h4@+z,~3.材料37℃恒溫水，新鮮培養(yǎng)基，無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶，液氮或干冰容4.步驟：4.1操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。4.2自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時蓋子易松掉。4.3將新鮮培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫，回溫
細(xì)胞冷凍保存常識2022/01/18
1.1.欲冷凍保存的細(xì)胞應(yīng)在生長良好的指數(shù)生長期且高存活率，約為80-90%的匯合度。1.2.冷凍前檢測細(xì)胞是否仍保有其*性質(zhì)，例如雜交瘤細(xì)胞應(yīng)在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產(chǎn)生。1.3.注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級等級，無菌且無色。4℃避光保存，勿作多次解凍。甘油亦應(yīng)為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因長期儲存后對細(xì)胞會有毒性。1.4.冷凍保存之細(xì)胞濃度：DMSO的濃度介于5%~20%之間。生長培養(yǎng)液的體積應(yīng)調(diào)整以適于所用細(xì)胞保護(hù)劑的變化。1.4.1
細(xì)胞傳代培養(yǎng)小技巧2022/01/17
1.細(xì)胞生長至高密度時，即須分至新的培養(yǎng)瓶中，一般稀釋比例為1:3至1:6，依細(xì)胞種類而異。2.材料：2.1.胰酶溶液(0.05%胰酶)：以10ml分裝于15ml無菌離心管中，保存于?20℃，使用前放在37℃水槽回溫。2.3.新鮮培養(yǎng)基2.4.無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶生3.步驟：3.1.附著型細(xì)胞(adherentcell)3.1.1.吸掉舊培養(yǎng)液。3.1.2.用D-PBS洗滌細(xì)胞一至二次。3.1.3.加入胰酶溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，37℃作用數(shù)分鐘，于倒立顯微鏡下觀察，
使用血清的小技巧2022/01/14
1.血清必須貯存于?20～-70℃，若存放于4℃，請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶，可將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中，由于血清結(jié)凍時體積會增加約10%，必須預(yù)留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。2.一般廠商提供之血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。!`%V53.瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或?70℃至4℃冰箱溶解一天，至室溫下全溶后再分裝，一般以50ml無菌離心管可分裝40～
細(xì)胞培養(yǎng)中培養(yǎng)基的作用2022/01/13
1.液體培養(yǎng)基貯存于4℃冰箱，避免光照，實驗進(jìn)行前放在37℃水槽中溫?zé)帷?S'、2.液體培養(yǎng)基(加血清)存放期為六個月，期間glutamine可能會分解，若細(xì)胞生長不佳可以再添加適量glutamine。3.粉末培養(yǎng)基配制(以1升為例)：3.1.細(xì)胞培養(yǎng)基通常須添加10%血清，因此粉末培養(yǎng)基之配制體積為900ml，pH為7.2-7.4。NaHCO3為另外添加，若將NaHCO3粉末直接加入液體培養(yǎng)基中會造成pH之誤差，或局部過堿。因此粉末培養(yǎng)基及NaHCO3粉末應(yīng)分別溶解后才混合，然后用CO2氣體調(diào)
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