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一、實(shí)驗(yàn)原理
用抗-HBe包被固相載體后,同時(shí)加被檢血清和合適滴度中和試劑HBeAg,若被檢血清中含有抗-HBe,則與包被抗-HBe競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合HBeAg,被檢標(biāo)本中抗-HBe越多,HBeAg被結(jié)合越多,而與包被抗-HBe結(jié)合就越少,加底物后顯色就越淺;反之越深。
二、主要試劑與器材
ELISA試劑盒:內(nèi)含已包被抗-HBe板條、HRP-抗HBe溶液、中和試劑HBeAg溶液、陽性和陰性對(duì)照血清,底物溶液(A液、B液)、終止液、洗滌液。
三、結(jié)果分析
1.P/N≤0.3為陽性。P/N>0.3為陰性。
2.P/N=待檢血清OD值/陰性對(duì)照OD值。
四、注意事項(xiàng)
1.試劑置2-4℃保存。取用時(shí)應(yīng)先置室溫平衡。干包被板條須密封防潮,凍存,取用后余者及時(shí)封存。
2.恰當(dāng)選好HBeAg的濃度。
3.試劑用前應(yīng)搖勻。
五、操作步驟
1.加樣:取出干包板條,按編號(hào)順序分別加50μl待檢血清、陰性對(duì)照血清和陽性對(duì)照血清于相應(yīng)孔中。設(shè)空白對(duì)照孔,除此孔外,每孔加HBeAg50μl、HRP-抗HBe50μl,振蕩混勻后,置43℃(或37℃)溫育1h。
2.洗滌:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿各孔,靜置20s,甩干。如此重復(fù)洗滌4次,在吸水紙上拍干。
3.顯色:每孔加顯色劑A、顯色劑B各50μl,振蕩混勻后置37℃避光顯色10-15min。
4.終止:每孔加終止液50μl,振蕩混勻。
5.酶標(biāo)儀檢測(cè):選用450nm波長,用空白孔調(diào)零之后測(cè)各孔OD值。
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