一、技術(shù)核心：基因編輯工具的發(fā)展與機(jī)制

1. 主流編輯系統(tǒng)

2. 遞送系統(tǒng)的突破

• 病毒載體

• AAV（腺相關(guān)病毒） ：低免疫原性、長期表達(dá)，但容量有限（<4.7kb）

• 慢病毒（LV） ：可攜帶大片段（~8kb），整合風(fēng)險較高

• 非病毒載體

• RNP復(fù)合物（Cas9蛋白+sgRNA） ：瞬時表達(dá)、降低脫靶與免疫反應(yīng)，適用于原代細(xì)胞

• 電穿孔/納米顆粒：用于體外細(xì)胞編輯，效率依賴細(xì)胞類型

二、細(xì)胞類型特異性編輯策略

1. 免疫細(xì)胞編輯

• T細(xì)胞：CRISPR敲除PD-1（Pdcd1）增強(qiáng)抗腫瘤活性，結(jié)合CAR-T治療實(shí)體瘤

• NK細(xì)胞：編輯NCR1基因增強(qiáng)腫瘤殺傷能力，用于血液瘤治療

• 造血干細(xì)胞（HSC） ：校正β-珠蛋白突變治療鐮狀細(xì)胞貧血，體內(nèi)編輯效率>30%

2. 神經(jīng)細(xì)胞編輯

• 原代神經(jīng)元：AAV遞送CRISPRi（dCas9-KRAB）抑制亨廷頓病突變基因表達(dá)

• 膠質(zhì)細(xì)胞：Cas9編輯GFAP啟動子驅(qū)動治療基因表達(dá)，緩解神經(jīng)炎癥

3. 腫瘤細(xì)胞建模

• 肝癌：同時靶向PTEN與TP53基因，模擬多基因驅(qū)動腫瘤發(fā)生

• 腦瘤：多重編輯（Trp53、Pten、Nf1）構(gòu)建膠質(zhì)母細(xì)胞瘤模型

三、應(yīng)用場景與典型案例

1. 疾病機(jī)制研究

2. 藥物開發(fā)平臺

• 靶點(diǎn)驗(yàn)證：TNFR2人源化T細(xì)胞（CRISPR-KI），用于抗體藥效評價

• 脫靶效應(yīng)篩查：全基因組測序（WGS）分析編輯后細(xì)胞系，評估藥物安全性

3. 基因治療

• 體外編輯回輸：編輯HSC治療免疫缺陷?。ㄈ鏢CID），臨床Ⅰ/Ⅱ期試驗(yàn)中

• 體內(nèi)原位編輯：脂質(zhì)納米顆粒（LNP）遞送mRNA-Cas9治療轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白淀粉樣變性